产品名称: nano tRNAsequencing kit
品牌: immaginabiotech
货号: NTRSQ-12
规格:12 rxns
适用物种:所有物种
总RNA输入量:总RNA ≥ 10微克
工作流程时间:2天
产品包含内容:
1、文库制备试剂盒 —— 包含全套工具,用于制备多重tRNA测序文库。
2、数据拆分工具 —— 高效稳定的测序数据拆分工具(激活后40天内可用),需安装Docker并配备NVIDIA GPU(至少8GB显存)。
操作流程:
1、tRNA分离与文库制备
使用试剂盒内提供的试剂完成湿实验操作步骤。
2、样本混合检测
最多可将6个样本混合至同一文库中,显著节省时间并降低检测成本。
3、桌面级测序
直接在实验台上使用牛津纳米孔技术(Oxford Nanopore Technology)进行测序。
4、数据分析
可选择自行分析数据,或联系我们的专业生物信息学团队为您提供分析服务。
测序数据可通过以下流程分析:
*原始数据质控:FastQC 检查测序质量。
*tRNA 比对:使用 Bowtie2 或 tRNAscan-SE 比对到参考基因组。
*表达定量:统计各 tRNA 同工型(isoacceptor)的 reads 数。
*修饰位点检测:通过突变率分析(如 Nanom6A)预测修饰位点。
测试结果
从tRNA丰度检测到全面分析
Nano-tRNAseq检测试剂盒结合Immagina生物信息分析流程,可实现tRNA表达量的检测与分析。(A)散点图显示处理组与对照组样本中tRNA表达量的平均计数;(B)火山图展示处理组与对照组差异表达的tRNA表达量。
化学修饰位点检测
化学修饰的鉴定基于对所有tRNA同工受体各位置碱基识别错误的检测(C)。热图显示处理组与对照组相比观察到的修饰显著变化:蓝色表示处理组样本可能存在的修饰缺失;红色表示处理组样本新增的修饰位点。
应用方向
1、基础研究:tRNA 在翻译调控、应激响应中的作用。
2、疾病机制:癌症、神经退行性疾病中 tRNA 表达异常。
3、微生物组:病原菌 tRNA 修饰与耐药性关联。
注意事项
1、避免 RNA 酶污染,全程使用无 RNA 酶枪头和离心管。
2、接头需避光保存,反复冻融不超过 3 次。
3、建议设置阳性对照(已知 tRNA 标准品)。
常见问题
Q1:能否检测 tRNA 修饰?
答:本试剂盒通过去修饰步骤提高测序效率,但修饰位点需结合生物信息学工具(如 Modomics 数据库)进一步分析。
Q2:适用于其他小 RNA 吗?
答:仅优化用于 tRNA,不适合 miRNA 或 snoRNA。
注:该中文说明书仅供参考,最终请以官F说明书为准。
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